1. 产品简介
Smartarose是一种球形琼脂糖凝胶过滤基质,Smartarose 4B和Smartarose 6B的琼脂糖含量分别为4%和6%。Smartarose CL凝胶是Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物,化学和物理性能更优异,流速更快。Smartarose CL凝胶耐有机溶剂,因此适合在有机溶剂中分离物质。Smartarose和Smartarose CL分离范围较广,适合对分子量不同的样品进行表征或分离。
表1. 产品性能
Smartarose | 4B | 6B | CL-4B | CL-6B |
% 琼脂糖 | 4 | 6 | 4 | 6 |
最佳分离范围 | 70×103-20×106 | 10×103-4×106 | 70×103-20×106 | 10×103-4×106 |
粒径(μm) | 45-165 | 45-165 | 45-165 | 45-165 |
推荐线性流速* (cm/h) | 11 | 14 | 26 | 30 |
pH 稳定性** | 4-9 | 4-9 | 3-13 | 3-13 |
试剂耐受 | 耐受凝胶层析常用溶液,如8M尿素、6M盐酸胍。 | 耐受凝胶层析常用溶液,如8M尿素、6M盐酸胍。也耐受乙醇、DMF、THE、丙酮、DMS、氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、吡啶、磷酸三乙酯和乙腈等有机溶剂。 |
物理性能 | pH或离子强度变化引起的体积变化可以忽略不计 |
灭菌 | 化学方法 | 水蒸气高压灭菌,120℃,20min |
*
** pH范围是我们根据实验和经验估算的。请注意:pH长期稳定性是指凝胶在长时间内其层析性能不会改变的pH范围。pH短期稳定性是指凝胶再生和清洗时稳定的pH范围。
2. 装柱说明
2.1 介质装填
装柱方法有两步,第二步应在恒压下进行,柱压见表2。凝胶层析的分辨率随柱床高度的增加而增加。因此,柱床高度最好在60厘米以上。
表2. 推荐装柱流速和压力
| 步骤1 流速(cm/h) | 步骤2 压力(MPa,bar,Psi) |
Smartarose 4B | 15 | 0.018,0.18,2.6 |
Smartarose 6B | 30 | 0.025,0.25,3.6 |
Smartarose CL-4B | 30 | 0.025,0.25,3.6 |
Smartarose CL-6B | 30 | 0.045,0.45,6.4 |
层析柱的装填(使用储液器装填)
用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
打开层析柱底部出口,开启泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
关闭泵,关闭层析柱出口。
如果使用储液器,去除储液器,将分配器置于层析柱中。
将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2.2 层析柱测试
为了检验层析柱的质量,应进行柱效测试,以确定理论塔板数和峰不对称系数。
洗脱液: 去离子水
样品: 2% (v/v) 丙酮水溶液或者1M NaCl溶液
如图1所示计算理论塔板数,用如下公式:N/m = 5.54 (VR/Wh)2 x 1000/L
计算峰不对称系数(AS)公式:AS = b/a
图1. 柱效检测方法实例
如果按说明书规定操作,得到的层析柱测试数值如下表:
凝胶 | 理论塔板数 | 峰不对称系数 |
Smartarose 4B,6B,CL-4B,CL-6B | >3000 | 0.8–1.5 |
3. 订购信息及相关产品
产品名称 | 货号 | 规格 |
Smartarose 4B | SEC0061 | 100ml |
SEC0062 | 500ml |
SEC0063 | 1L |
SEC0064 | 10L |
Smartarose 6B | SEC0071 | 100ml |
SEC0072 | 500ml |
SEC0073 | 1L |
SEC0074 | 10L |