1.产品介绍
rProtein G Beads是用于分离和纯化lgG的亲和层析介质,具体性能见表1。Protein G是一种分离自G Streptococci的细胞壁蛋白,它可通过其Fc片段结合哺乳动物IgG。重组protein G含有高亲和结合位点,减少了非特异性吸附。Protein G和Protein A有不同的lgG结合特性,相比Protein A, Protein G对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力,它还可以结合不能与Protein A很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1,具体结合能力见表2。
AbPur rProtein G Kit 提供3ml rProtein G Beads重力预装柱,抗体纯化所需的缓冲液,方便客户使用,操作简单,纯化效率高。试剂盒详细组分见表3。
表1. rProtein G Beads产品性能
指标
性能
基质
4%琼脂糖微球
配体
重组蛋白G
载量
>30mg 人lgG/ml 介质
粒径 (μm)
45-165
最大压力
0.1 MPa, 1 bar
pH 稳定范围
3-10
储存缓冲液
20% 乙醇
储存温度
2°C - 8°C
表2. Protein A和Protein G对不同抗体的结合能力
种属
亚型
Protein A 结合力
Protein G 结合力
Human
IgA
varible
—
IgD
IgE
IgG1
++++
IgG2
IgG3
IgG4
IgM
Avian egg yolk
IgY
Cow
++
Dog
+
Goat
Guinea pig
Hamster
Horse
Koala
Liama
Monkey(rhesus)
Mouse
IgG2a
IgG2b
+++
variable
Pig
Rabbit
no distinction
Rat
Sheep
+/-
++++=结合能力强; ++=结合能力中等; —=结合能力弱或没有结合
表3. AbPur rProtein G Kit组分
组分名称
货号
规格
数量
AbPur rProtein G Column
SA016K-1
3mL
1
Ab Binding/Wash Buffer
SLB017100
100mL
2
Ab Elution Buffer
SLB018100
2.问题及解决方案
问题
原因分析
推荐解决方案
柱子反压过高
筛板被堵塞
清洗或更换筛板
填料被堵塞
按照第3部分进行树脂清洗
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜 (0.22 或0.45 μm) 过滤,或者离心。
样品流速过低
样品或缓冲液中有气泡
去除样品或柱子中的气泡
样品和缓冲液进行脱气
洗脱组分中没有目的蛋白
样品中抗体浓度太低
使用其抗原做配体的介质
抗体被降解
适当的提高洗脱pH;
将样品脱盐或透析到合适的Buffer中
样品与Protein G结合能力较弱
更换介质,如rProtein A Beads进行纯化
回收率逐渐减低
上样量太多
减少上样量
柱子太脏,载量降低
按照第3部分进行树脂CIP清洗
3.订购信息及相关产品
产品名称
rProtein G Beads
SA016005
5mL
SA016025
25mL
SA016100
SA016C
1L
AbPur Protein G Kit
SA016K
3次
rProtein G Beads 4FF
SA020005
SA020025
SA020100
SA020200
200mL
SA020500
500mL
SA020C
AbCap G 4FF
SA020C11
1 X 1mL
SA020C51
5 X 1mL
SA020C15
1 X 5mL
SA020C55
SA020CS
3X1mL+1X5mL