蛋白酶K来源于林伯氏白色念球菌,Proteinase K from Tritirachium album;free of DNA contaminants, suitable for Microbiome research, lyophilized powder, ≥30 units/mg protein

别名:肽链内切酶;Endopeptidase K;蛋白酶-K;蛋白酶 K

CAS号: 39450-01-6 EC 号: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB) MDL编号: MFCD00132129
制造商品牌: 西格玛 Sigma-Aldrich
货号(SKU): SAE0151
CAS号: 39450-01-6
MDL号: MFCD00132129
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说明

一般描述

纯化无DNA蛋白酶K SAE0151已经过严格的质量控制测试,以确保通过35个循环对16S和18S rDNA(使用通用引物对)进行PCR扩增时,不存在可检测水平的污染DNA。

蛋白酶K是一种稳定的丝氨酸蛋白酶,具有广泛的底物特异性。即使在存在去污剂的情况下,它也会以天然状态降解许多蛋白质。从能够在角蛋白上生长的真菌中分离出蛋白酶K,该酶可以消化天然角蛋白。该酶属于具有活性位点催化三联体(Asp39-His69-Ser224)的枯草杆菌蛋白酶家族。
裂解的主要位点是与具有封闭α氨基的脂肪族和芳香族氨基酸的羧基相邻的肽键。它因其广泛的特异性而被广泛使用。蛋白酶K通常通过随后的苯酚提取而变性。

近年来,通过广泛采用与培养无关的分析技术(例如16S rRNA基因测序和宏基因组学),微生物群落的研究发生了彻底变化。由于样品制备过程中的DNA污染是这些基于序列的方法的主要问题,因此不含DNA污染的DNA提取试剂至关重要。
 

应用

  • 蛋白酶K在分子生物学应用中经常用于消化不需要的蛋白质,例如来自微生物、培养细胞和植物的DNA或RNA制剂的核酸酶。
  • 去除与阳离子蛋白结合的内毒素,例如溶菌酶和核糖核酸酶A,可用于分离肝、酵母和绿豆线粒体。
  • 酶在膜上的定位测定
  • 处理石蜡包埋的组织切片以暴露抗原结合位点以进行抗体标记。
  • 在传染性海绵状脑病(TSE)研究中,从脑组织样本中消化蛋白质以检测朊病毒。
在分离DNA和RNA的过程中,用于核酸酶的蛋白水解失活。
用于去除内毒素结合的阳离子蛋白,如溶菌酶和核糖核酸酶A。
据报道,其可用于分离肝、酵母和绿豆线粒体
用于测定酶在细胞膜上的定位
用于石蜡包埋组织切片的处理,暴露用于抗体标记的抗原结合位点。
用于可传播海绵状脑病(TSE)研究中朊病毒脑组织样本蛋白的消化。
 

生化/生理作用

蛋白酶K是一种稳定且具有高活性的丝氨酸蛋白酶。晶体和分子结构研究证据表明该酶属于枯草素家族,具有活性位点催化三联体(Asp39-His69-Ser224)。它在一系列广泛的环境中均稳定:pH,缓冲盐,去污剂(SDS)以及温度。 在0.1-0.5% SDS存在的情况下,蛋白酶K可保持活性,在不损害分离DNA完整性的前提下,可以消化DNA制剂中的多种蛋白质和核酸酶。
 

特点和优势

纯化的不含DNA的蛋白酶K SAE0151经过严格的质量控制测试,以确保其将不含DNA污染物,适用于微生物组研究。
 

单位定义

在pH 7.5,37℃条件下,一单位的酶每分钟将水解尿素变性的血红蛋白以产生与1.0 μmol酪氨酸等同的颜色(Folin-Ciocalteu试剂提供的颜色)。
 

制备说明

蛋白酶K在1%Triton X-100和0.5%(w/v)SDS中具有活性。SDS和尿素会使蛋白质底物变性,导致消化速率增加。这些试剂使蛋白酶K本身更慢地变性。
 
 

属性

质量水平

200

specific activity

30 units/mg protein

分子量

28.93 kDa

特点

DNA free

运输

wet ice

储存温度

−20°C

 

安全信息

象形图

Health hazard

警示用语:

Danger

危险声明

危险分类

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2

储存分类代码

11 - Combustible Solids

WGK

WGK 1

个人防护装备

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves

商品规格
属性名称属性值
储存温度 Storage temp.-20°C低温冷冻
全球实时库存 Availability √美国St. Louis ≥ 20 | 欧洲Eur. ≥ 16 | 東京Tokyo ≥ 5 | 香港与北京 ≥ 20
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